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超声波法主要利用超声的空机械振动和空化效应来破坏灵芝抱子细胞壁.例如,Alzorqi等利用超声波提取P-D-葡聚糖,在优化条件下p-D-葡聚糖的产量为5.228mg/g.微波法.微波法利用微波的穿透能力和热效应,使细胞内部的温度迅速上升,从而使细胞内部的压力超过细胞壁膨胀所能承受的压力而破碎,促使其有效成分释放.例如,先将灵芝抱子进行微波处理,而后在低温深加工,灵芝抱子的破壁率可达99%以上.超临界提取法.超临界提取法利用气体在超临界状态下的性质,即流体的性质,使有效成分被流体萃取,Li等M运用超临界CO2萃取技术提取灵芝抱子,萃取率达到37%.机械法机械法的优点是操作简单、易行;缺点是机械设备投资大、运行成本较高.
酶解法.酶解法通过利用几丁质酶、纤维素酶或溶壁酶等酶液的一种或多种,使灵芝抱子细胞壁中的成分降解,释放其有效成分.使用生物酶辅助提取灵芝酸A,终实现灵芝酸A的提取率达到0.54%. 溶菌法.利用微生物和灵芝抱子一同发酵,让微生物在发酵过程中降解灵芝抱子细胞壁.利用益生菌枯草芽抱杆菌、嗜酸乳杆菌与灵芝抱子进行液态发酵,终使得灵芝抱子破壁率达到85%以上.化学法化学法的优点与生物法较为相似;缺点是提取溶剂易导致有效成分变性,且溶剂残留不易去除.溶剂提取法.溶剂提取法利用“相似相溶”原理,使灵芝抱子在水、乙醇等溶剂中长时间浸泡或回流,从而使有效成分扩散到溶剂中.例如,Lee等8采用25%乙醇提取灵芝中的成分,终减压浓缩并定容至500mL保存,通过灵芝的25%乙醇提取物,研究其通过Nrf2/HO-1通路增强细胞的抗氧化作用,该方法对灵芝孢子的提取率较好.
河南驻马店市近几年研究段木熟料栽培灵芝,其产品质量可靠,效益较好。2009年至2010年度,有部分芝农,因前期发菌、芝棒下地等技术环节管理不到位及春季天气温度低等方面的原因,芝棒污染严重,造成了资源浪费及经济损失,个别地方因此产生菌种质量纠纷,影响着灵芝产业的发展。对此,笔者对我市灵芝主产区的芝棒污染原因进行了专门的调查研究,并提出了相应的措施。污染原因芝棒污染的根本原因是竞争性杂菌入侵感染,芝棒大范围污染事件多发生在灵芝栽培老产区,其污染原因归纳起来主要有以下几个方面:栽培品种抗逆性减弱抗逆性减弱是品种种性退化的一个表现,这是芝棒污染的内因。菌种不合格主要表现为栽培种带有杂菌;菌龄过长,菌种老化,萌发力差,吃料慢,菌丝弱,接种后封面时间长;高温、变温培养的菌种,菌丝纤细无力,扩展缓慢。
种植流程截椴装袋将原材截成30cm长的短椴木,直径超过20cm者,辟开材树皮朝外,用利刀修光断面、枝叉面,以免剌破袋膜,引起感染杂菌,将木材装入40x65cm规格的0.005厚的低压聚乙烯袋内,每袋装3---6段,用绳子扎紧袋口。蒸汽灭菌将菌袋按排叠放,排间留有20厘米的空隙,采用一层横排一层竖排“井”字形叠放,排放好底层覆盖农膜,外层再盖一层彩条布,四周用沙袋将农膜及彩条布压实,防止漏气。当温度达到100T后,持续10h不间断加热,灭菌结束后,闷3—5h,等灶内温度下降到60T以下,取出菌袋放入接种棚内。菌袋接种汉中多采用开放式接种,一般在1月下旬进行,先将菌种足量放入棚内(按每袋菌棒0.25kg),再用二氯异尿酸钠消毒粉(保菇灵)进行棚内灭菌,30x4mx2.5m大棚用量为20包,灭菌4—5h。接种人员进入时用酒精喷雾灭菌,8人为一组,日接种20t,采用两端断面接种,先脱袋接种袋底菌种,再接种袋口,每袋用种0.2-0.25kg。
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